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一級(jí)生物安全柜可保護(hù)工作人員和環(huán)境而不保護(hù)樣品。氣流原理和實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)櫥一樣，不同之處在于排氣口安裝有HEPA過(guò)濾器。所有類型的生物安全柜都在排氣和進(jìn)氣口使用HEPA過(guò)濾器。一級(jí)生物安全柜本身無(wú)風(fēng)機(jī)，依賴外接通風(fēng)管中的風(fēng)機(jī)帶動(dòng)氣流，由于不能對(duì)試驗(yàn)品或產(chǎn)品提供保護(hù)，目前已較少使用。

二級(jí)生物安全柜是目前應(yīng)用最為廣泛的柜型。 與Ⅰ級(jí)生物安全柜一樣，Ⅱ級(jí)生物安全柜也有氣流流入前窗開(kāi)口，被稱作“進(jìn)氣流”，用來(lái)防止在微生物操作時(shí)可能生成的氣溶膠從前窗逃逸。與Ⅰ級(jí)生物安全柜不同的是，未經(jīng)過(guò)濾的進(jìn)氣流會(huì)在到達(dá)工作區(qū)域前被進(jìn)風(fēng)格柵俘獲，因此試驗(yàn)品不會(huì)受到外界空氣的污染。 Ⅱ級(jí)生物安全柜的一個(gè)獨(dú)特之處在于經(jīng)過(guò)HEPA過(guò)濾器過(guò)濾的垂直層流氣流從安全柜頂部吹下，被稱作“下沉氣流”。下沉氣流不斷吹過(guò)安全柜工作區(qū)域，以保護(hù)柜中的試驗(yàn)品不被外界塵埃或細(xì)菌污染。

按照NSF49的中的規(guī)定，二級(jí)生物安全柜依照入口氣流風(fēng)速、排氣方式和循環(huán)方式可分為4個(gè)級(jí)別：A1型，A2型(原B3型),B1型和B2型。所有的二級(jí)生物安全柜都可提供工作人員、環(huán)境和產(chǎn)品的保護(hù)。

A1型安全柜前窗氣流速度最小量或測(cè)量平均值應(yīng)至少為0.38m/s。70%氣體通過(guò)HEPA過(guò)濾器再循環(huán)至工作區(qū)，30%的氣體通過(guò)排氣口過(guò)濾排除。A2型安全柜前窗氣流速度最小量或測(cè)量平均值應(yīng)至少為0.5m/s。70%氣體通過(guò)HEPA過(guò)濾器再循環(huán)至工作區(qū)，30%的氣體通過(guò)排氣口過(guò)濾排除。A2型安全柜的負(fù)壓環(huán)繞污染區(qū)域的設(shè)計(jì)，阻止了柜內(nèi)物質(zhì)的泄漏。

二級(jí)B型生物安全柜均為連接排氣系統(tǒng)的安全柜。連接安全柜排氣導(dǎo)管的風(fēng)機(jī)連接緊急供應(yīng)電源，目的在斷電下仍可保持安全柜負(fù)壓，以免危險(xiǎn)氣體泄漏如實(shí)驗(yàn)室。其前窗氣流速度最小量或測(cè)量平均值應(yīng)至少為0.5m/s(100fpm)。B1型70%氣體通過(guò)排氣口HEPA過(guò)濾器排除，30%的氣體通過(guò)供氣口HEPA過(guò)濾器再循環(huán)至工作區(qū)。B2型為 全排型安全柜，無(wú)內(nèi)部循環(huán)氣流，可同時(shí)提供生物性和化學(xué)性的安全控制。